伊紅染色液(水溶,5%)
伊紅(Eosin)又稱曙紅,屬人工合成染料中的呫噸類染料,為桃紅色或粉紅色的粉末。 分子式為 C20H6O5Br4Na2,分子量為 691.86。伊紅適宜于蘇木精配合染色以顯示正常或病理組織的形態結構。水溶性伊紅 Y 含有一個醌型苯環的發色團和兩個形成鈉鹽的酸性助色團(R-COONa、R-ONa)。這種形成鹽類的酸性染料在水中溶解時解離為帶負電荷的色酸部分(R-COO 、R-O ),即染料的有色部分和帶正電荷的鈉離子部分(Na+)。染色時伊紅 Y 帶負電荷的色- 酸部分-不組織內帶正電荷的物質以離子鍵的形式結合而顯色。
伊紅染色液(Eosin Y Stain)采用 *防腐劑,操作簡單,不使用汞、甲醇等有毒試劑,可以用于組織切片或培養細胞的染色。可以和免疫熒光染色或免疫組化染 色配合使用。一方面可以在伊紅染色后進行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進行伊紅復染。本染色液可以重復使用,直至認為效果不佳時再換用新的染色液,染色后細胞漿呈粉紅色或紅色。
Eosin Y Stain(5%) 100ml 500ml RT 避 光
1、蒸餾水
2、4%多聚甲醛
3、系列乙醇
操作步驟(僅供參考):
根據實驗具體要求操作,如果用于普通染色應稀釋后,參考如下步驟:
1、樣品處理
a) 對于石蠟切片:
二甲苯中脫蠟 5~10min。
換用新鮮的二甲苯,再脫蠟 5~10min。無水乙醇 5min。
90%乙醇 2min。
70%乙醇 2min。蒸餾水 2min。
b) 對于冰凍切片:
蒸餾水 2min。
用 4%多聚甲醛固定 10min 以上。蒸餾水洗滌 2 分鐘。
換用新鮮的蒸餾水,再洗滌 2min。
2、伊紅染色:對于上述處理好的樣品,伊紅染色液染色 0.5~2min(根據染色結果和要求調整時間)。如果需要直接觀察,可以用 70%乙醇洗滌 2 次。如需脫水、透明后封片按后續步驟進行,70%乙醇洗滌后仍可按照后續步驟進行脫水、透明和封片處理。
注:如果用于免疫組化等染色后的復染,參考上述步驟在其它染色完成后進行伊紅染色。
3、脫水、透明、封片或進行其它染色a)脫水、透明、封片:95%乙醇脫水 2min。換用新鮮的 95%乙醇再脫水 2min。二甲苯透明 5min。換用新鮮的二甲苯,再透明 5min。用中性樹膠或其它封片劑封片。顯微鏡下觀察,細胞漿呈粉紅色或紅色。
b)進行其它染色:
如果進行免疫熒光染色,或進行 Hoechst 等熒光染料的染色,在伊紅染色液染色后:
70%乙醇洗滌 2 次,每次 2min。
PBS 或生理鹽水或 TBS 或 TBST 等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡 5min。
進行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色。
1、如果需要脫水、透明和封片處理,需自備二甲苯,中性樹膠或其它封片劑。如果樣品是 石蠟切片,需自備 90%乙醇,無水乙醇以及二甲苯。
2、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期: 12 個月有效。